как регенерировать колонку ?

[Юлия К]

Добрый день,
Подскажите, пожалуйста, методику регенерации колонки Reprosil Pur 300 ODS- 250*4.6*3 (Элсико)
Колонка была использована на определении интерферона альфа 2б. Объем 20 мкл ( конц-я 0,2 мг/мл), фаза ТФУ в воде/ ТФУ в АсN
тарелки упали, разделение практически не происходит,
отмывали ее ацетонитрилом, все равно плохо разделяет.оставляли на ночь на обратный ход отмывку- тоже самое.
В паспорте на колонку про регенерацию ничего не сказано.
Спасибо!

[Константин Сычев]

Добрый день, Юлия! Колонка - это расходный материал, для нее нет никаких инструкций. Таковые прилагаются только к материалам, которые имеют ограничение по давлению или на совместимость с теми или иными ратворителями.
ОФ фазы типа С18 на основе силикагеля регенерируются просто - например, 30% дихлорметана, или 50% ацетона или 50% ТГФ в ацетонитриле в обратном направлении.
Если после этого при работе в обычном направлении разделения нет - значит переверните ее - она еще некоторое время может, наверное, доработать. Если нет, то колонка просто отработала свое.
Вообще, при разделении белковых препаратов колонки долго не живут - это аксиома.
Надеюсь, перед колонкой стоит предколонка? Если нет, то это критично. Предколонка в этом случае обязана быть, менять ее надо на таких объектах почаще, раз в неделю. Лучше иметь несколько предколонок, которые менять, а грязные потом скопом регенерировать (см. выше как). Или менять пореже, но уже не регенерировать, а просто выбрасывать.

[Константин Сычев]

В середине февраля, т.е. примерно через 2 недели у нас будет большой курс по технике работы на приборе с практикумом. Вам он будет полезен, там мы более детально ответим на конкретные вопросы по тематике.
На этом курсе действует прогрессирующая скидка на число участников от одной организации, так что приходить имеет смысл, например, по трое.
Вот ссылка на объявление: viewtopic.php?f=23&t=261
и на программу курса: viewtopic.php?f=24&t=210

[Юлия К]

Спасибо за помощь и информирование по семинару.

[Katk82]

Добрый день.
Подскажите, пожалуйста, можно ли регенерировать колонку. Основная причина - резкое повышение давления до 3000. Колонка проработала ровно год при использовании 2-3 раза в неделю. Эффективность деления была на одном уровне, по этому поводу вопросов нет. Колонка Phenomenex 5U ODS(2) 250 x 4.6 мм 5мкм. Используется для анализа меламина в сточных водах. Элюент - 0.1М KH2PO4 + 0.1M NaOH. На ночь систему заполняем 10% метанолом (по рекомендации сервис-инженера, производившего наладку оборудования). Дело в том, что закупка новых расходных материалов, в том числе и колонок, очень проблематична и может доходить по времени до полугода и выше, хоть и предприятие довольно крупное. Пробовали ставить колонку наоборот, давление практически не снизилось.
С уважением, Екатерина.

[Иван Стыскин]

Ну для начала убрать колонку соединить инжектор напрямую с детектором и посмотреть давление на потоке без колонки.
Далее если оно в пределах 5-15 бар, можно поставить колонку но в обратном (!) направлении и промывать.
Лучше без пропускания подвижной фазы через кювету детектора.
Методика регенерации ОФ вэжх колонок (у вас как раз ODS - такая) описана выше - смотрите сообщение КонстантинС.

[Константин Сычев]

Екатерина, добрый день!

тут так много интересного сказано, что увеличение давления - явно не самое главное))

1. Для начала: 3000 чего? пси? 3000 пси - это примерно 200 атмосфер, или бар. Пока на колонке вполне можно работать, даже если у Вас обычный насос с пределом в 400 атм. До 4500 он легко вытерпит - скорее даже выбьет неаккуратно затянутые соединения.

2. Для колонки, в которую колят реальные образцы, год - это вполне заслуженный срок. Увы и ах - в хроматографии параметры разделения определяются не прибором (как везде у "нормальной" техники), а колонкой - и странно покупать вспомогательный инструмент (прибор) без основной его детали - колонок. Если руководство этого не понимает - просто покажите вот эту статью viewtopic.php?f=17&t=231

Хроматограф без колонок работать не будет точно так же, как и без розетки 220 В.

3. Я не знаю кто "разрабатывал" это разделение, но это одно из худших условий, которые я видел в своей жизни. Удивительно, что колонка не умерла в первый же месяц-два. вообще говоря,колонки на основе силикагеля использовать в щелочной среде нельзя, поскольку силикагель в ней просто растворяется. Колонка прожила так долго исключительно из-за Вашей бережной о ней заботе и чрезвычайно редкому применению.

Стандарное разделение на меламин проводят в режиме ион-парной ОФ хроматографии, а не в "чистой" ОФ, как в Вашем случае. Кроме того, что в таком элюенте колонки на силикагельной основе быстро умирают - я еще не верю, что в этих условиях Вы получаете надежные результаты. Можно посмотреть на хроматограмму реальной матрицы с добавкой стандарта на уровне ПДК?

Чтобы посмотреть альтернативы, забейте в гугле "melamine hplc analysis determination pdf" и посмотрите условия в разных статейках.