Методики в фармацевтике.

[MeOH]

Предлагайте к обсуждению любые методики, связанные с контролем качества лекарственных средств.
Фармкопейные статьи, подбор, приборов, колонок и условий хроматографирования, стандарты.

[Nadin S.]

Раз есть такая тема, напишу здесь, или лучше новую открыть?
Поставили мне такую задачу: Количественное определение гидроксимочевины методом ВЭЖХ. Есть на неё и фармстатьи, и фармакопея , условия везде одинаковые: колонка 250*4,6, 5 мкм С18, ПФ - вода, скорость 0,5 мл/мин, длина волны 214 нм. Время удерживания 3,5 мин!!!
Дело в том, что я так не хочу. Может НФ попробовать? У меня есть колонки ZorbaxСN на 250 мм и LunaNH2 старая на 150 мм. Может кто-нибудь посоветует, как условия подобрать?

[Константин Сычев]

Конечно, при скорости 0.5 три минуты - это полное отсутствие удерживания.

Да, конечно, попробуйте и то и другое. Только картинки здесь выложите - всем же интересно. Наверное, можно начать с 30% воды в ацетонитриле. Дальше регулировать: если удерживание будет маловато, воды надо уменьшить.

[Ольга]

По поводу
"Количественное определение гидроксимочевины методом ВЭЖХ".
Специально почитала эту фармстатью по PHARMACOPOEIA 5.0. Мне кажется, что как пользователь, так и экспетр должны с большем уважением относится к регламентируемым "правилам игры" в фармацевтической промышленности. Там написаны такие условия: С18 колонка 4.6х 250мм Элюент МеОН:Вода 5:95, 0.5 мл\мин, УФ 214 нм Есть необходимые условия разделения определяемого вещества и референтного гидроксиламина. Время удерживания в-ва 5 мин, длина хроматограммы в 3 раза длиннее (а не 3 мин) Все нормально и понятно. Зачем изобритать велосипед! Есть указания по потенциальным примесям (resolution: minimum of 1.0 between the peaks due to impurity A and to hydroxycarbamide..) А где будут эти примеси на придуманных вами хроматограммах в среде ацетонитрил:вода? Все это написано и исполняется на фармацевтических предприятиях для обеспечения надлежащего качества. Аргумент "я так не хочу" по меньшей мере странный. С уважением

[Константин Сычев]

колонка 4.6х 250мм ... 0.5 мл\мин... Время удерживания в-ва 5 мин

Уважаемая Ольга! Ваши результаты только подтверждают полную неработоспособность методики. 5 мин при 0.5мл/мин - это мертвое время колонки. Вещество не удерживается. Методика неработоспособна и не может пройти валидацию. Результаты, полученные по этой методике, не имеют никакого смысла.

[Раченко Юлия]

Добрый день!Не знаю куда и лучше написать!?Остановлюсь здесь!
Перед нами стоит задача определения водорастворимых и жирорастворимых витаминов в образцах плазмы и сыворотки крови.Определять хотим на ВЭЖХ-МС(есть МС-QTRAP5500 и ВЭЖХ-UltiMate3000).В данный момент заказали стандарты основных витаминов.С колонками пока определиться не можем,есть несколько вариантов(Wakosil II 5C 18 RS и Wakosil II 5C 18 HG, ZORBAX SB-C и ZORBAX XDB C8 или еще Kromasil C18).Какую лучше заказать?Тоже самое обстоит с пробоподготовкой. Пока все это только в теории на практике не пробовали.Поэтому хотелась бы получить от вас,если это возможно, информацию о вышеизложенной проблеме.Так же у нас есть возможность приехать на ваши семинары по ВЭЖХ,при условии,что вы проводите семинары совместно с практикой. При общении с вами по телефону вы сказали возможно в конце апреля будет семинар!Хотелось бы получить более точную информацию об условиях и времени проведения семинара.Заранее спасибо!

[Иван Стыскин]

По витаминам Константин Сычев думаю подскажет, вот по ссылке разделения http://www.hplc.ru/train_tasks.htm

Колонки C18-AQ есть в наличии, вот цены http://www.shop.hplc.ru/index.php?categ ... 9%F2%E8%21

Зорбакс и прочие также есть, но цены на них неоправданно завышены, все-таки за бренд надо платить.

Семинар будет с практимумом, ориентировочные даты 25-27 апреля. Место проведения Москва, ул.Бакунинская, д.69/1 (м.Бауманская).
Точные даты будут в этот четверг определены и вывесим анонс на hplc.ru и в теме новостей на форуме.

[Раченко Юлия]

Добрый день Иван! Спасибо за информацию! Прочитав Ваш ответ на изложенную мною проблему, извините, но возникли следующие вопросы:
1.Можно Колонку С18-AQ использовать для определения водорастворимых и жирорастворимых витаминов?
2.Каким образом мы сможем получить информацию по витаминам от Сычева К:
А) ответит на форуме;
Б) на семинаре.
3. Сможем ли мы получить на практикуме следующую информацию:
А) пробоподготовка;
Б) условия хроматографирования;
В) качественное и количественное определение витаминов.
Т.е. сможем ли мы по результатам вашего семинара: взять плазму, сделать пробоподготовку, провести анализ на ВЭЖХ-МС и получить отчет о качественном и количественном анализе.

Надеюсь, что не сильно загрузила Вас своими вопросами, это объясняется тем, что в Красноярске мы такой информации ни от кого получить не можем. Заранее благодарна Вам и надеюсь на дальнейшее информационное сотрудничество!

[Иван Стыскин]

Надеюсь он не слишком занят и не в командировке так что ответит.
Отвечу на первый вопрос, да конечно можно. Можно и другие ОФ колонки с фазами С18, ODS-3, XDB-C18.
Вот к примеру на вэжх колонке Reprosil ODS-3 водо и жирорастворимые витамины:
http://reprosil.com/xedin.php?point=wat ... tamin.html
http://reprosil.com/xedin.php?point=fat_soluble.html

[Константин Сычев]

Юлия, добрый день! Извиняюсь, не выбирался долго в форум На все Ваши вопросы отвечу сегодня вечером исчерпывающе

[Константин Сычев]

Юлия, добрый день!

Из арсенала "Элсико" под жирорастворимые есть специальная колонка С30 (Reprosil C30), под водорастворимые лучше Reprosil-Pur C18-AQ. По поводу совмещения с МС-детектором.. с С30 проблем нет - отличный выбор. А вот классическое разделение водорастворимых с ион-парным реагентом не получится - из-за МС-детектора.

Что тут можно предпринять? Во-первых, можно все поделить и без ион-парного на С18 колонке. Плохо - низкое удерживание В1, да и старт - с воды, что плохо для чувствительности. Я бы так не делал. Во-вторых, можно на свой страх и риск купить смешанную С18+слабо катионообменную колонку типа PrimeSep. По идее, на ней должно быть разделение, похожее на С18 в ион-парном режиме - но без ион-парной добавки.

Третий и наиболее реальный вариант - разделить водорастворимые в HILIC варианте, у меня это неплохо получалось на силикагеле небольшой удельной поверхности; я брал Halo-HILIC. Там В1 наоборот довольно крепенько сидит, и нужен небольшой градиент.

По типоразмерам - подходите к вопросу аккуратно. Вам нужно не попасть ни в одну из крайностей. Диаметр колонки, наверное, будет оптимален 2 мм. Длина - 150-250 мм. Зернение - 3 мкм на 150мм или 5мкм - на 250мм.

По семинару практикуму - сегодня выкладываю программу и шаблон договора. Приезэжайте, привозите стандарты водо, и жирорастворимых - в наличии есть и С30, и силикагель - все поколим, мне самому интересно если даже не сможем все посмотреть по причине ограниченного "свободного" времени практикума (в запасе будут 3-4 часа на "вольности"), я сам все досмотрю потом частным порядком. Особенно мне интересны жирорастворимые, но водо- я бы тоже еще раз посмотрел в хорошем наборе, да и градиент бы пооптимальнее сразу бы подобрали.

[Константин Сычев]

Вот полная информация о семинаре-практикуме

[Arinka]

Иван, Константин, Добрый день!
Опишу свою проблему, может Вы сможете подсказать пути её решения.
У меня есть препарат, в котором содержится фруктоза и аскорбиновая кислота. Мне нужно их разделить, т.к. небольшой пик фруктозы мешает определению аскорбинки.
Ввиду небольшого разнообразия хроматографических колонок, я пытаюсь их разделить на колонке Waters Spherisorb Phenyl, 250мм; 4,6 мм; 5 мкм.
ПФ: А - вода, подкисленная ТФУ до рН 2,5; В - ацетонитрил.
Я пробовала разные варианты градиента, но к сожалению и фруктоза и аскорбинка плохо удерживаются на колонке и выходят на 3 минуте.
Можете ли вы что то посоветовать?
Заранее, спасибо!

[Константин Сычев]

Арина, учите хроматографию! 15мМ фосф. буфер, рН 2.5 фосф. кисл., скорость 2, длина волны 260. в конце дня промывайти водой, затем заполняйте ацн на ночь. утром промывка водой - и опять работа на кислом буфере.

[Arinka]

Спасибо большое за ответ!
Я уже подобрала градиент с ПФ: А-0,6 % фосф.к-та, только рН покислее 1,7 и В-ацетонитрил. Скорость я установила наоборот поменьше 0,8. А длина волны у меня 220, т.к. в составе есть ещё активная субстанция, которой небольшое количество и при 260 она плохо поглощает.

[Константин Сычев]

Арина, Вы делаете ошибку со скоростью - это однозначно. Варьирование скорости в интервале ниже 1.5 мл мин для 5 мкм фаз с диаметром 4-4.6мм лишено смысла. Использование 250мм колонок в градиенте - тоже ошибка. Уж не обессудьте...

[Arinka]

Если я увеличиваю скорость, то наблюдаю, как пики сливаются. От градиента я так же отказаться не могу, т.к. другая активная субстанция без добавления органической фазы не выходит с колонки.

[елена]

добрый день!
Почему-то не могу повторить методику определения посторонних примесей в парацетамоле, которая описана в ГФ 12. Я всего лишь заменила колонку С8, колонкой С18, все остальные условия соблюдены, но на хроматограммах нет пика 4-хлорацетанилида!Может быть кто-нибудь поможет в этом вопросе!??Спасибо!

[Константин Сычев]

Если я увеличиваю скорость, то наблюдаю, как пики сливаются. От градиента я так же отказаться не могу, т.к. другая активная субстанция без добавления органической фазы не выходит с колонки.

Арина, такое может быть (слияние пиков при такой несущественном увеличении скорости) если они практически не удерживаются. Может, стартовать со ступени, в которой есть соль? например, с 15мМ ксилого фосф. буфера: кажется, 2.5гр. одно- или дву- замещенного фосфата калия на 250 мл воды , далее до рН 2.5 фосфорной к-той (если фосфат двузамещенный, то около 2.5 мл, если одно - то меньше).

И еще - я так и не понимаю ситуации с детектированием. 1) фруктоза никак не может помешать определению аскорбинки, т.к. аск. поглощает на 260 нм сильно, а фруктоза еле видна на 205. 2) оптимальный выход - двухволновое детектирование.

[Константин Сычев]

добрый день!
Почему-то не могу повторить методику определения посторонних примесей в парацетамоле, которая описана в ГФ 12. Я всего лишь заменила колонку С8, колонкой С18, все остальные условия соблюдены, но на хроматограммах нет пика 4-хлорацетанилида!Может быть кто-нибудь поможет в этом вопросе!??Спасибо!

Добрый день! Я не знаю на вскидку методик, но предположу, что это один из последних пиков на хроматограмме, т.е. замена фенольной гр. на хлор приводит к значительному увеличению удерживания. Вариант, скорее - Вы не дождались пика - если он точно должен быть. Или из-за бОльшего удерживания он так размазался, что стал не виден. Версия коэлюирования - вряд ли, не на что там накладываться.
Я бы, честно, вообще попробовал С16-амидную фазу для подобного разделения. Амидка полярнее С18, удерживание парацетамола сильнее, что позволило бы увеличить долю Ацн - то есть в итоге селективность получилась бы более оптимальная, хлорацетанилид не был бы на таком уж "отшибе".