декстран 40

[елена]

добрый день, подскажите как я могу избавиться от системного пика на хроматограммах декстрана при определении ММР. системный пик выходит слишком близко к пику декстрана с небольшим молекулярным весом (при калибровке) и мешает при расчетах. использовала колонку TSK Gel 4000 PW, длиной 300 мм и пробовала на колонках asahipak GS-320 и 620.

[Константин Сычев]

Добрый день, Елена! Хорошо, давайте попробуем разобраться. Для начала нужны условия:
1. тип детектора и параметры детектирования
2. геометрические размеры колонки и объемная скорость потока
3. состав элюента
4. состав растворителя пробы
5. температура колонки

[елена]

Использовала колонку TSK Gel 4000PW размером 7,5 мм х 300 мм, 17 мкм, так же пробовала на двух последовательно соединенных колонках Asahipak GS-320 HQ (7,5 мм х 300 мм, 6 мкм) и GS-620 HQ (7,5 мм х 300 мм, 7 мкм). Условия были следующие: детектор рефрактометрический, скорость потока 0,8 мл/мин, температура колонки 40 градусов, подвижная фаза-натрия сульфат 7 г/л с добавкой натрия азида. Пробу растворяла в ПФ. Вводимые пробы были с концентрацией 1 мг/мл, 5 мг/мл, 10 мг/мл. С наименьшей концентрацией хроматограмма получалась совсем плохая, системный пик большой и на хвосте у декстрана. Хроматограммы пробы с концентрацией 10 мг/мл лучше,но системный пик остался.

спасибо

[Константин Сычев]

Я про самое главное забыл еще нужна сама хроматограмма и средняя ММ декстрана хроматограмму в виде джипега в сообщение просто можно прикрепить) а по ММР декстранам википедия выдает "Dextrans are available in multiple molecular weights ranging from 3,000 Da to 2,000,000 Da", поэтому и вопрос соответственный) видимо, у Вас довольно легкий декстран? Пытались пробовать что-нибудь банальное вроде обычной кальциевой формы ПС-ДВБ катионита под олигосахариды?

[Константин Сычев]

Посмотрел что за колонки. 620ая вообще не в тему, да и 4000-ая тоже не очень. Лучшая картинка должна быть на 320-ой. Это так? Все-таки хотелось бы знать разброс молекулярных масс декстрана..

[Иван Стыскин]

MW 40,000 я так понимаю. У 320-ой это предел определения. 620-ую и вправду ни к чему добавлять. 4000pw должна работать, но там разброс большеват разделение видимо так себе. И правда ждем картинку.

[елена]

загрузила картинку, надеюсь такая тоже подойдет. хроматограммы на G4000PW лучше, но может не хватает длины колонки?других подходящих колонок у меня нет, поэтому пробовала только на этих. мне необходимо построить калибровку по стандартам декстрана со следующими молекулярн.весами: Mw=270000; Mw=80900; Mw=48600; Mw=11600; Mw=5220

[Константин Сычев]

Ааааааа так тут в широком диапазоне... конечно, тогда 4000-ая лучше, потому что эта колонка, настроенная именно на большую линейность, т.е. она выигрывает в диапазоне линейности, проигрывая в разрешающей способности. А 620 и 320-ая настроены на бОльшую разделяющую способность в своем узком диапазоне.

Что можно сделать... во-первых, решение тут нужно экстенсивное - одной колонки не хватит. Из имеющихся - я бы поставил связку из 4000 и 320, причем 4000-ая первая, а после нее 320-ая. Если есть финансовая возможность, можно у Элсико докупить как вторую колонку Reprosil 50 SEC, которая на силикагеле (значит значительно дешевле), и как раз настроена на низкие М, т.е. использовать связку 4000-ная + Reprosil 50 SEC. По калибровке точнее подскажет Иван, но скорее я не ошибаюсь, он где-то на 5000-20000 настроена.

[Иван Стыскин]

В широком и не самом удачном диапазоне, нужна связка...

Диапазон MW 8000 - 30000 у колонки Reprosil 50 SEC
Описание http://www.reprosil.com/xedin.php?point=sec.html

В наличии в Москве 50-ка есть http://www.shop.hplc.ru/index.php?productID=4683

[елена]

есть возможность доcтать TSK Gel 3000PW и TSK Gel 5000PW. Диапазон от 1000 до 300000.Эти колонки подойдут??

[Иван Стыскин]

3000-ную добавить к 4000-ной, больше не нужно.
http://www.sigmaaldrich.com/etc/mediali ... p/8524.pdf

[елена]

попробовала на колонках 4000PW+ GS320. хроматограммы не очень, да и время выхода слишком большое. и все равно с легкими дектранами появляется пик(на хроматограмме он на сороковой минуте). неужели от него можно избавиться только заменой колонки на 3000PW или на ту, что посоветовали Вы!!??

[Иван Стыскин]

На последней картинке нормальное разделение. Колонки полимерные TSK поэтому скорость подачи и давление регулировать можно, но осторожно.
Время выхода естественно увеличилось поскольку это сэт (две и более) последовательно соединенных колонок.
А пик видимо примесь от которой увы не избавится.

[елена]

спасибо за ответ. может быть подскажите известные Вам испытательные лаборатории, занимающиеся высокомолекулярными веществами, которые смогли бы заняться разработкой методики "Определение ММР декстрана 40", поскольку проверяющую меня организацию не устраивают мои хроматограммы((. С оформление договора, оплата своевременная. Спасибо

[Иван Стыскин]

Напишите техническое задание и пожелания Константину, думаю он возьмется.
viewtopic.php?f=40&t=270
И можно мне продублировать на ivan {coбa4kа} hplc.ru

[Константин Сычев]

Елена, это не системный пик, это примесь мономера (любого). Это никак не способно повлиять на точность определения ММР, никаким образом. Разделение отличное.
Конечно, я могу сделать полное разделение, и за меньшее время, колонки нужные у меня есть.
Но мои услуги довольно дороги, разделение обойдется в 100, и еще колонки примерно в 120 (Иван скажет точнее). Плюс в том, что колонки на складе, т.е. их не надо ни откуда везти. Оплата по факту, т.е. я сначала смотирю что все делится, потом заключаем договор, я пишу отчет с калибровкой и реальными образцами.