помощь в замене колонки Grace Smart RP18

[СВЕТЛАНА]

Добрый день. Подскажите, пожалуйста, какую можно использовать колонку вместо GraceSmart RP18 (4.6 x 250 mm; 5mkm), но более устойчивую к низким значениям рН (около 2,5) и при наличии в подвижной фазе ион-парного агента.

[Константин Сычев]

Добрый день, Светлана.
Насколько помню, у Грейса С18 колонки по жизни какие-то не очень стандартные,всегда с уменьшенной долей углерода и уменьшенной площадью поверхности. У более "стандартных" фаз при той же доли ацетонитрила будет бОльшее удерживание. Если у Вас вещество полярное - это хорошо, тогда просто придется чуть накинуть долю ацетонитрила. Если довольно неполярное, то, может, имеет смысл перейти на 150мм колонку с 3мкм.

Из репертуара "Элсико" я бы посоветовал 250х4.6 Reprosil-Pur Basic C18. У нее, кстати, гидродинамика хорошая - меньше чем на 2 мл/мин работать смысла нет. Но готовьтесь, что удерживание подрастет. Элюент придется немного скорректировать.

[Константин Сычев]

А рН 2.5 - это детский сад ничего специального здесь не нужно

[Иван Стыскин]

Согласен, думаю разделение будет даже лучше. http://www.shop.hplc.ru/index.php?productID=3907
В наличии в Москве колонки такие есть.
У грэйса тоже не должно быть проблем с 2.5 судя по информации от производителя.

[СВЕТЛАНА]

Если у грейс не должно быть проблем с рН-2.5 ,то тогда почему колонка быстро садится ? (начинают плохо разделяться пики и хроматограммы получаются очень кривые и плохо воспроизводимы). Колонка в последнее время выдерживает такие условия (длина волны 220 нм ; температура комнатная ; скорость потока 0,9 мл/мин ; ПФ: 14,3 гидрофосфата натрия 2хводного+500 мл воды бидист+5 мл триэтиламина+1,4 натрийлаурилсульфата+конц фосфорная кислота до рН=2,5+400 мл метанола и 100 мл воды бидист) не более чем 2 месяца (при условии что на ней работаем только в таких условия постоянно). Ранее, года так 3 , на колонке работали по полгода и было все хорошо .
У меня вопрос : либо как увеличить срок службы этой колонки (поскольку она нам больше подходит), либо какую взять можно колонку , чтоб срок службы у нее был подольше ?

[Константин Сычев]

К сожалению, Светлана, как я вижу из этой "методики", проблемы вовсе не в колонке. Условия хроматографирования не выдерживают никакой критики. Это не ион-парная хроматография. Это что-то ужасно-мицеллярное.. 5 мл триэтиламина зачем? это вообще бред.. лаурилсульфат.. тушите свечи. Конечно, колонка быстро забивается всей этой гадостью.

Вобщем, колонка здесь ни при чем. Условия для рутинного анализа непригодны. Говорю это даже не видя и не зная аналитов.

[Иван Стыскин]

да, и правда странноватая методА. в сообщении можно "Добавить вложения". если есть возможность добавьте получаемые хроматограммы. поглядим что можно улучшить... эта МВИ утвержденная здесь в РФ? или фирма из-за бугра так советует работать?

[СВЕТЛАНА]

Добрый день ! Мы работаем по ФСП , утвержденной РФ (анализ транексамовой кислоты). По ФСП прописаны именно такие условия , единственно что там можно менять количество метанола в подвижной фазы для того, чтобы время удерживания транексамки было около 11 мин. Работаем только в обращенно-фазовом режиме.

[СВЕТЛАНА]

По ФСП нам необходимо общитать наличие примесей и количественное содержание , если количественное мы еще как то можем определить , то при анализе примесей возникают проблемы.

[Константин Сычев]

Светлана, картинки нормальные для такой неудачной системы. Что ж, могу предложить два рецепта...

1) могу предположить, что у вас нет термостата колонки. Если так, то срочно и обязательно его купите. Хотя бы самый простейший. Установите по умолчание температуру 30 градусов, а лучше - 40.

2) Сначала немного уменьшите долю метанола, чтобы удерживание целевого было в райне 15-20 минут. Затем повышайте скорость потока до тех пор, пока давление (если у насоса предел 400 атм) не выйдет на уровень 250 атм - на метаноле это нормально. Чем выше (в разумных рамках, т.е. до 45 градусов) температура будет выставлена на термостате, тем больший ресурс по давлению вы будете иметь - тем быстрее будет анализ.

Учтите, что повышение температуры снизит удерживание и потребует дальнейшего снижения доли ацетонитрила. Я бы делал так: сначала бы установил температуру в диапазоне 30-40 градусов, затем при той же скорости потока снижением дол метанола добился бы удерживания целевого до 15-20 минут. Потом начал повышать скорость потока, пока не исчерпаю ресурс до давлению (до 250-280 атм).

К чему эти рецепты? Вам потому что необходимо:
1) стабилизировать условия анализа - а особенно температуру;
2) немного увеличить удерживание всей группы (целевое и две или три примеси вокруг него);
3) при увеличенном удерживании постараться ускорить анализ, чтобы не ждать так долго.

[СВЕТЛАНА]

Добрый день . Термостат у нас имеется , в процессе работы постоянно температура 25 град, как прописано в ФСП. Мне всетаки не понятно , почему раньше (3 года назад) с колонкой не было ни каких проблем , и вообще не возникало ничего подобного , почему щас то проработав на колонке 2 месяца ее можно уже выкидывать . По этой ФСП работаем уже давно. соблюдаем все требования прописанные в статье , только в ней не прописана какая именно колонка , сказано : хроматографическая колонка из нержавеющей стали размером 250х4,6 мм заполненная обратнофазным сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм.

[Константин Сычев]

Температуру 25 градусов в принципе нельзя выставлять на термостате - это бессмысленно. Температура термостата должна на 5-10 градусов превышать температуру окружающей среды.

А в остальном тут сложно так вот прямо разобраться. Не меняли поставщика, например?

[СВЕТЛАНА]

Поставщика не меняли. Спасибо за помощь.

[Иван Стыскин]

Предположу по хроматограммам, что проба достаточно грязная и соответственно нужна некоторая пробоподготовка и очистка образца. Если методика про это молчит, то начать с шприцевых фильтров 0.2 мкм. Возможно этого окажется недостаточно и "убивание" колонки лишь замедлится. Тогда очень желательно даже необходимо использование предколонок с фазой С18. Стоимость их по сравнению с колонкой на порядок ниже, на разделение они не влияют, а вот времена удерживания на колонке плыть перестанут. Грязь будет задерживаться на предколонке. Насколько убилась колонка можно судить по давлению в вэжх системе. После ухода с 10 минуты на 12.5 по идее давление дожно было вырасти процентов на 10-15. Есть такие данные?

[СВЕТЛАНА]

Добрый день! Пробы фильтруем через нейлоновые мембранные фильтры размер пор 0,45 мкм. давление обычно было 17 - 17,5 МПа, а сейчас стало около 20 МПа.

[Иван Стыскин]

Ну что и требовалось доказать... Надо брать фильтры 0.2 мкм материал тот же, они еще бывают со стеклянным предфильтром, предколонки C18 и можно еще поставить предколоночный фильтр после инжектора ввода пробы, все окупится с лихвой http://www.hplc.ru/protect.htm

[СВЕТЛАНА]

Большое спасибо за помощь !!!!!!!!!!!!!!!!!!