Регулярная промывка ВЭЖХ-системы до и после работы

[achemist]

Здравствуйте!
К сожалению, я пока новичок в таком интересном деле, как ВЭЖХ. Если можно хотелось бы получить совет по поводу промывки ВЭЖХ-системы в начале и конце рабочего дня (или другого временного периода). Планируется работа с фосфатным буфером, имеющим значение pH=3 или pH=5. Как я понял из информации в тематических форумах,такой буфер требует очень пристального внимания из-за того, что в нем быстро начинает расти всякая живность, а также что он не очень полезен для уплотнений плунжеров насоса. В связи с этим хотел бы узнать Ваши рекомендации относительно следующего:
1) Как часто нужно промывать ВЭЖХ-систему при работе с подобным буфером?
2) Как часто нужно готовить новый буфер?
3) Какой фосфатный буфер менее предпочтителен для колонки (Nucleosil 100-5 C18) - с рН=3 или рН=5?
4) Каков рекомендуемый состав смеси элюентов для промывки?
5) Какова рекомендуемая продолжительность промывки?
7) Система имеет следующие варианты: а)Autopurge system (здесь указываются мобильная фаза и время промывки) б) Rinse autosampler в) Purge autosampler. Нужно запускать все эти операции?
6) Можно ли оставлять капилляр с фильтром в бутыли с фосфатным буфером в течение продолжительного времени или необходимо его хранить вне бутыли?
Очень надеюсь на Вашу отзывчивость и благодарю за внимание.

[Константин Сычев]

Добрый день!
В целом все понимаете верно)
1. система - это прибор или колонка? что и как промывать - это зависит еще и от того - меняете ли элюент, или всегла работаете на одном и том же примерно. если элюенты водные, то все еще зависит от концентрации буфера. если это обычные 15-25 мМ фосфата, а ацетонитрила довольно мало, меньше половины, то не надо слишком нервничать. насос реально может пострадать, только если капитально просохнет - там его придется вручную водичкой потом реанимировать, а то и входной клапан мыть/менять. так что по-хорошему просто в конце дня дист. водой промывать сам насос. колонку тоже можно, но не всегда например, я эту делаю - признаюсь. колонка конечно поменьше проживет без промывок, но... я жалею свое время тратить на кондиционирование в начале работы.
2. как часто? летом он у меня пару-тройку дней стоит, но в холодильнике. дело еще в рН. нейтральный рекомендую использовать свежий, а вот кислый- нормально. кислота - хороший консервант. поскольку нейтральный буфер применяют значительно реже кислого, то проблем как правило не бывает
3. рН буфера никак не зависит от колонки, а от сущности проводимого разделения здесь я рекомендую наши курсы ежемесячные, ближайшие (новый сезон) - в сентябре
4. для промывки после водных элюентов применяю 5-10% раствор ацетонитрила в воде
5. несколько объемов системы, т.е. мл 30 гоню через насос, и для каждой колонки несколько ее объемов, для Вашей - 3-5 мл будет достаточно.
7. это к поставщику прибора или покупайте у нас
6. наоборот фильтр пусть будет всегда погружен в жидкость. можно и не в элюент, а просто в промывочную. если он высохнет, из него воздух придется выгонять, зачем эта лишняя возня
пожалуйста

[Иван Стыскин]

По 7-му вопросу, речь видимо о шимадзу. Целесообразно после серии однотипных анализов запускать 3 вариант промывки. Если хочется большей надежности то можно пользоваться первым вариантом. Второе это скорее не промывка, скорее инициализация. Нужно смотреть мануал к сэмплеру.