ВЭЖХ-колонка с привитой сульфо-фазой

[JulSS]

Добрый день!
Возник ряд вопросов при работе с колокной SUPELCOSIL™ LC-SCX 25 cm × 4.6 mm 5 μm 120 Å:
1) при воспроизведении валидированной методики сильно сместилось время выхода пика: по НД должен выходить на 35 мин, получили - 25 мин;
2) позже было обнаружено, что колонка заполнялась производителем для транспортировки смесью фосфатный буферный раствор : ацетонитрил (65 : 35), а вводили в эксплуатацию смесью вода : ацетонитрил (6 : 4). Могло ли это негативно повлиять на сорбент и соответственно сместить время выхода пика? И если да, то возможно ли это исправить?
3) также интересует общий принцип ухода за сульфо-колонками. Есть ли особенности или ограничения, или все аналогично обычным фазам?
С нетерпением жду комментариев, заранее благодарю!

[Иван Стыскин]

Добрый.
После установки колонка промывалась? По хорошему сначала надо было ее промыть - 90:10 Вода:Ацетонитрил.
Поскольку колонка тестируется на цитозине производитель применяет буферный раствор, по видимому в нем и оставляет для продажи / хранения.
Колонка эта не сульфо а сильный катионообменник, что есть ионный режим. Попробуйте промыть 90:10 Вода:Ацетонитрил 200мл, заглушить и оставить на сутки. Далее перейти на рабочую подвижку.

[JulSS]

Добрый день, Иван!
Спасибо большое за ответ. Да, колонку после установки промывали вода : ацетонитрил (65 : 35). Попробую вопросизвести после промывки вода : ацетонитрил (9:1), возможно, дело все-таки в методике.

[JulSS]

Иван, добрый день!
Попробовала способ промывки вода:ацетонитрил (9:1), заглушила на сутки и потом снова воспроизвела методику - результат тот же. Также ввела новую колонку в эксплуатацию - время выхода пика так же 25 мин. Возможно, это недочет методики, разработчики будут разбираться. Хотелось бы задать еще несколько вопросов по ионно-обменным колонкам: можно ли их хранить в смеси ацетонитрил : вода (9:1) или в чистом ацетонитриле? Или все же они насыщаются одной фазой и хранятся в ней же? Бытует мнение, что эти колонки очень капризные в обращении.
Также не могли бы вы порекомендовать литературу по ионно-обменной ВЭЖХ?

[Иван Стыскин]

Лучше хранить такие колонки в чистом ацетонитриле если срок дольше двух недель, но рекомендации очень разные в зависимости от производителя колонки. Я бы такой вопрос адресовал производителю если в документации отсутствует пункт column storage.
Основная рекомендация это перед хранением промыть колонку 10 обьемами от ион-парного реагента в тех же пропорциях которыми она была заполнена буфером. Например, если 40:60 Ацетонитрил/буфер то и берется для промывки 40:60 Ацетонитрил/вода.