Загрязнение колонки C18

[PhysChemLab]

Доброго времени суток

У нас вот такая вот проблемма. Наша лаборатория полтора года назад приобрела аминокислотный анализатор UHPLC модели Nexera 2 фирмы Shimadzu. К ней мы купили колонки YMC-Triart C18 1.9 μm. До сих пор мы делали в основном заколы только стандартов аминокислот фирмы Sigma Aldrich. После 20-30 заколов вместе с ожидаемыми пиками стандартов начинают выходить неизвестные пики в огромных количествах. Общая интенсивность пиков уменьшается, а через еще примерно столько же анализов давление колонки повышается на 100 бар. Мы сдеалали вывод, что колонка загрязнилась, однако нам не известны причины загрязнения.
Мы используем метод:
Column: YMC-Triart C18 1.9 μm
(75mmL.x 3mml.D 1.9 μm)
Mobile phase: A) 20mmol/L potassium phosphate buffer (pH=7)
B)Acetonitrile/Methanol/water =45/40/15 (v/v/v)
Gradient elution Flow rate: 0,8mL/min Column temp.: 35C Injection volume: 0.1μL

как предлогается фирмой Шимадзу: http://www.shimadzu.com/an/journal/sele ... tion04.pdf

Заранее подготавливаем наши стандарты следующим образом:

1) Добавляем в 2.5мкмоль/мл стандарт в 1-10мл 0.1 нормальную соляную кислоту
2) Фильтруем раствор с помощью мембранных фильтров 0.2 μм перед заколом.

Все растворители и буфферы фильтруем с помощью аппарата Бухнера с фильтрами в 0.22мкм.

В конце анализов промываем колонку раствором ацетонитрил/метанол/вода - 45/40/15 2 часа.

Пожалуйста подскажите в чем может быть причина загрязнения, так как мы уже испортили 2 колонки.

Сейчас мы пытаемся регенирировать очередную испорченную, по счету 3ью колонку, с помощью раствора ацетонитрил/ТГФ, как рекомендуется в инструкции колонки.
Заранее благодарим за любую подсказку.

[Константин Сычев]

Да не вы испортили колонку, а это такая сама по себе г...ная система)) улучшаешь одно-ухудшаешь другое. ведь не просто так там так все быстро, понимаете? за все надо платить. за производительность в данном случае - надо платить колонками. Примерно по 1 в месяц.
Да и обидно - какая производительность - по 2 часа колонку промывать? а главное - бесполезно. можете не дергаться и ничего не мыть.
Просто купите обычную железобетонную колонку 150х4.6 с 5-ти или 3-х микронником С18, поставьте скорость в 2 раза больше - да и работайте. С предколонкой поставьте. Не ведитесь на рекламу. И на быстрые инновационные технологии.
Но личние пики - это надо проверить. Действовать надо стандартно - поколите бланки. Холостые то есть пробы. Поколите на новой колонке лучше. Если пики есть на холостых, то тогда какие-то загрязнения копятся на инжекторе. У вас самплер? Чем промывается самплер после вкола?
Если любая другая колонка на холостых пробах лишних пиков не показыват - смело впиливайте рекламацию на все побитые колонки. Денег, скорее, не вернут - зато хоть перед начальством отмоетесь))
Мое мнение - что это колонки дерьмовые. ЮМС - одни из самых худших колонок.

[PhysChemLab]

Большое спасибо за ответ.. А то мы уже паниковали и думали, что мы как-то портим колонки. Сейчас поставили другую колонку С18 3.9х150 и вроде пока все в порядке.
Да у нас автосемплер, загрязнение вроде чуть есть из системы, потому что закол на новой колонке реагент+вода дала несколько небольших пиков, но это не страшно, помоем.