Процедура очистки (регенерации) хроматографической колонки

[Иван Стыскин]

Установите на насосе предел максимального давления, соответствующий колонке которую собираетесь промывать. Обычно эта информация указана в материалах предоставляемых производителем колонки. Прокачайте систему новым растворителем и присоедините колонку в обратном направлении. Количество необходимого объема растворителя (в объемах колонки) указано в скобках после каждого растворителя.

Органические подвижные фазы используются для промывки и регенерации колонок с силикагелем, с полярными фазами и с неполярными фазами:

Для колонок с силикагелем допустимо использование процедуры промывки:
1. гексаном - (20 объемами колонки)
2. метилен хлоридом - (20 объемами колонки)
3. ацетонитрилом (безводный) - (20 объемами колонки)
4. метилен хлоридом - (15 объемами колонки)
5. гексаном - (10 объемами колонки)

Для колонок с полярными привитыми фазами (CN, NH2) допустимо использование процедуры промывки:
1. метилен хлоридом - (20 объемами колонки)
2. изопропанолом - (20 объемами колонки)
3. метанолом - (20 объемами колонки)
4. изопропанолом - (15 объемами колонки)
5. метилен хлоридом - (10 объемами колонки)

Для колонок с неполярными привитыми фазами (С18, С8, С4, С2, Phenyl) допустимо использование процедуры промывки:
1. ацетонитрилом - (20 объемами колонки)
2. метилен хлоридом - (20 объемами колонки)
3. гексаном - (20 объемами колонки)
4. метилен хлоридом - (15 объемами колонки)
5. ацетонитрилом - (10 объемами колонки)

Водные или водно-органические подвижные фазы используются для промывки и регенерации колонок с неполярными фазами, ионообменных колонок и колонок с полярными фазами:

Колонки с неполярными привитыми фазами (С18, С8, С4, С2, Phenyl) допустимо использование для промывки:

При анализе биополимеров/белков:
1. подвижной фазой без буфера - (20 объемами колонки)
2. в градиенте (3 раза):
- (А) – 0.1% ТФУ в воде
- (В) – 0.1% ТФУ в растворе 1:2 = ацетонитрил:изопропанол
- от 25% В до 100% B в теч. 30 мин
3. Если не удается достичь результата, попробуйте промыть раствором 0.1N HNO3:изопропанол в соотношении 1:4 - (40 объемами колонки)**
4. Промойте раствором вода:изопропанол в соотношении 1:4 - (10 объемами колонки)

** - Может использоваться только для колонок с полимерно-связанными фазами. Подача насосом при малой скорости потока (!).

Колонки для общих разделений допустимо использование процедуры промывки:
1. подвижной фазой без буфера - (20 объемами колонки)
2. ацетонитрилом - (20 объемами колонки)
3. метилен хлоридом - (10 объемами колонки)
4. ацетонитрилом - (15 объемами колонки)
5. подвижной фазой без буфера - (10 объемами колонки)

Колонки с полярными фазами допустимо использование для промывки:

Колонки с циано- (CN) фазой допустимо использование процедуры промывки:
1. водой (степень чистоты для ВЭЖХ) - (20 объемами колонки)
2. ацетонитрилом - (20 объемами колонки)
3. метилен хлоридом - (20 объемами колонки)
4. ацетонитрилом - (15 объемами колонки)
5. водой (степень чистоты для ВЭЖХ) - (10 объемами колонки)

Колонки с амино- (NH2) фазой допустимо использование процедуры промывки:
1. подвижной фазой
2. водой (степень чистоты для ВЭЖХ) - (10 объемами колонки)
3. подвижной фазой

Ионообменные (анионо-, катионо-) колонки допустимо использование процедуры промывки:
1. подвижной фазой буферной - (20 объемами колонки)
2. буферным раствором, увеличивая концентрацию (не более 2М) от 1 до 5 раз - (20 объемами колонки)
3. водой (степень чистоты для ВЭЖХ) - (20 объемами колонки)
4. 0.1М ЭДТА (Этилендиаминтетрауксусная кислота) - (20 объемами колонки)
5. водой (степень чистоты для ВЭЖХ) - (20 объемами колонки)
6. ацетонитрилом (20 объемами колонки)
7. водой (степень чистоты для ВЭЖХ) - (20 объемами колонки)

Приблизительный объем хроматографических колонок:

- аналитические
2.1x150 мм - 0.3 мл
2.1x250 мм - 0.5 мл
4.6x150 мм - 1.8 мл
4.6x250 мм - 2.2 мл

- препаративные
10x150 мм - 6.5 мл
10x250 мм - 9.3 мл
22x150 мм - 35 мл
22x250 мм - 49.3 мл